·基本定義與化學(xué)結(jié)構(gòu)

ATTO 488 NHS Ester是一種基于羅丹明（Rhodamine）結(jié)構(gòu)的綠色熒光染料，由以下三部分構(gòu)成：

ATTO 488熒光核心：賦予化合物綠色熒光特性，激發(fā)波長約500 nm，發(fā)射波長約520 nm，量子產(chǎn)率高達(dá)0.80，熒光信號強(qiáng)且背景低。

NHS酯基團(tuán)：作為活性反應(yīng)基團(tuán)，可與蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子中的游離伯氨基（-NH?）發(fā)生特異性酰胺化反應(yīng)，形成穩(wěn)定共價鍵。

連接鏈：短鏈結(jié)構(gòu)確保熒光染料與反應(yīng)基團(tuán)的空間兼容性，同時維持分子整體穩(wěn)定性。

·基本信息介紹（資料卡）

CAS號：863772-22-9

中文名稱：ATTO488琥珀酰亞胺酯

英文名稱：ATTO 488 NHS Ester；ATTO 488 SE；AT 488 NHS；ATTO 488 Succinimidyl Ester

分子量：686.67

分子式：C29H26N4O12S2

性狀：液體

顏色：Orange to red

純度：≥95%

儲存條件：-20℃以下冰凍、干燥保存，避免反復(fù)凍融

供應(yīng)商：西安凱新生物科技有限公司

結(jié)構(gòu)式：

安全性：

操作時需佩戴防護(hù)裝備，避免接觸皮膚和眼睛。

如不慎接觸，請立即用大量清水沖洗，并尋求醫(yī)療幫助。

·實用指南

實驗方案：ATTO 488 NHS 酯標(biāo)記蛋白

一、蛋白樣品準(zhǔn)備要求

濃度：建議 2–10 mg/mL（低于 2 mg/mL 會降低標(biāo)記效率）。

pH 值：8.5 ± 0.5（若低于 8.0，用 1 M 碳酸氫鈉調(diào)節(jié)）。

緩沖液：不含伯胺（如 Tris、甘氨酸）或銨離子，否則干擾標(biāo)記。

二、燃料儲備液配制

用無水 DMSO 溶解 ATTO 488 NHS 酯，配成 10 mM 儲備液，混勻備用。

三、染料用量與反應(yīng)條件

推薦摩爾比：染料 : 蛋白 = 10:1（可根據(jù)情況調(diào)整為 5:1、15:1 或 20:1）。

將計算好的染料儲備液緩慢加入蛋白樣品中，輕搖混勻后短暫離心。

四、偶聯(lián)反應(yīng)

避光，室溫孵育 60 分鐘。

每 10–15 分鐘輕緩翻轉(zhuǎn)反應(yīng)管，避免劇烈振蕩。

五、偶聯(lián)產(chǎn)物純化（Sephadex G-25 柱）

按說明書準(zhǔn)備好凝膠柱。

將反應(yīng)液加至柱頂，待液面進(jìn)入樹脂后立即加入 PBS（pH 7.2–7.4）。

繼續(xù)加 PBS 洗脫，收集有色帶的染料-蛋白偶聯(lián)物組分。

·相關(guān)試劑

BDP TR amine

Cyanine5 azide

BDP TMR ceramide

BDP 581/591 DBCO

Alkyne-PEG4-iodide

sulfo-Cyanine7 DBCO

Cyanine5.5 NHS ester

LumiTracker Lyso Red

sulfo-Cyanine7 maleimide

Universal CPG type I, 500A

DusQ 2 dT phosphoramidite

sulfo-Cyanine5.5 carboxylic acid

SIMA-dT phosphoramidite, 6-isomer

Biotin phosphoramidite (hydroxyprolinol)

LumiPure Plasmid Spin Miniprep Kit

以上內(nèi)容均由西安凱新生物科技有限公司YNN編輯整理

該試劑僅用于科研實驗，不可用于人體