一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測小鼠樣本中的GR蛋白濃度。將抗GR單抗包被于微孔板，加入樣本后形成抗原-抗體復合物，再與HRP標記的二抗結合，最終通過TMB底物顯色反應定量分析。

　　二、試劑盒組成

　　組分規(guī)格保存條件

　　預包被微孔板96T/48T2-8℃避光

　　GR標準品6濃度梯度-20℃凍存

　　HRP標記檢測抗體1瓶2-8℃避光

　　TMB底物液A/B各1瓶2-8℃避光

　　注：不同批號試劑嚴禁混用

　　三、關鍵操作步驟

　　樣本處理

　　血清/血漿：離心后取上清，避免溶血

　　組織勻漿：按1:9比例加入裂解液，冰上超聲破碎

　　標準曲線制備

　　凍干標準品需用200μL標準品稀釋液復溶，靜置10分鐘后上下顛倒混勻15次

　　梯度稀釋時每次稀釋后需短暫離心，避免氣泡產生

　　孵育條件

　　37℃溫育90分鐘(每步加樣后輕拍板邊緣混勻)

　　洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用，每次浸泡時間≤30秒

　　四、結果判定標準

　　有效性驗證

　　標準曲線R2≥0.99，最高濃度OD值在2.0-2.4之間

　　復孔變異系數(shù)(CV%)應<15%

　　濃度計算

　　樣本OD值在標準曲線20%-80%范圍內時可直接計算

　　超出范圍需重新稀釋(建議梯度稀釋1:5/1:10/1:20)

　　五、常見問題解決方案

　　現(xiàn)象可能原因處理措施

　　全板不顯色漏加HRP酶標抗體檢查加樣順序并重做^^4^^

　　背景值過高洗滌不充分增加洗滌次數(shù)至5次^^3^^

　　標準曲線非線性標準品溶解不均復溶后延長離心時間^^4^^

　　注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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