小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒實驗說明書

　　BS-2378小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒

　　實驗原理

　　采用雙抗體夾心法，通過預(yù)包被抗15-LOX單抗捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白，再與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測定450nm吸光度，濃度與OD值呈正相關(guān)。

　　試劑盒組成

　　組分48T規(guī)格96T規(guī)格保存條件

　　預(yù)包被酶標(biāo)板8×6條8×12條2-8℃

　　標(biāo)準品0.5mL(0-10ng/mL)0.5mL(0-10ng/mL)-20℃

　　生物素化檢測抗體60μL(100×)120μL(100×)2-8℃

　　TMB顯色液(A/B)各3mL各6mL避光2-8℃

　　20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫

　　樣本處理要求

　　血清/血漿：

　　使用EDTA抗凝管采集，2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血。

　　短期保存于2-8℃(≤48小時)，長期需-20℃分裝，避免反復(fù)凍融。

　　組織勻漿：

　　按1:9比例加入PBS(pH7.4)，機械勻漿后離心取上清。

　　操作步驟

　　標(biāo)準品梯度稀釋：取7支EP管，按1:2比例稀釋至0.156-10ng/mL。

　　加樣孵育：每孔加入100μL標(biāo)準品/樣本，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌顯色：棄液后加入生物素化抗體，37℃孵育60分鐘，TMB避光顯色15分鐘。

　　終止檢測：加入終止液后30分鐘內(nèi)讀取450nm吸光度。

　　結(jié)果分析

　　標(biāo)準曲線擬合：推薦四參數(shù)邏輯回歸(R2>0.99) 。

　　靈敏度：0.156ng/mL，線性范圍0.156-10ng/mL。

　　注意事項

　　顯色液需避光保存，避免金屬離子污染。

　　濃縮洗滌液需用蒸餾水1:20稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　高脂樣本需離心去除懸浮物，避免假陽性。

　　注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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