Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀可區(qū)分相同質(zhì)量數(shù)的不同離子。乙烯,氮?dú)夂鸵谎趸茧x子的質(zhì)量數(shù)同為28,但質(zhì)量虧損導(dǎo)致三者的準(zhǔn)確質(zhì)量有細(xì)微差異。儀器分辨率達(dá)到2300(半高峰寬)時(shí),可以區(qū)分出乙烯,但氮?dú)夂鸵谎趸既匀徊荒軈^(qū)分;而當(dāng)采用更高的分辨率5000時(shí),即可區(qū)分三者。
目前廣泛使用的用于蛋白質(zhì)鑒定的質(zhì)譜分析主要使用兩種類型質(zhì)譜:一種是MALDI-TOF直接對(duì)分子量進(jìn)行測(cè)量;另一種是使用ESI-MS高分辨率質(zhì)譜分析電噴霧得到的多電荷信號(hào),然后對(duì)信號(hào)進(jìn)行去卷積分析,獲得準(zhǔn)確分子量數(shù)值。
普通質(zhì)譜和高分辨質(zhì)譜的區(qū)別,直觀一點(diǎn)可以說是:能夠?qū)y(cè)得離子質(zhì)量數(shù),準(zhǔn)確到小數(shù)點(diǎn)后兩位和后六位的區(qū)別。高分辨質(zhì)譜能夠?qū)⒎肿恿肯嗖詈苄〉膬煞N物質(zhì)進(jìn)行區(qū)分,從而準(zhǔn)確推斷分子元素。厲害的高分辨質(zhì)譜甚至可以取代部分元素分析。
這兩種方法各有其優(yōu)點(diǎn)及適用的領(lǐng)域。同時(shí)配備了這兩種質(zhì)譜分析系統(tǒng),可用于各類蛋白質(zhì)樣品分子量測(cè)定,滿足包括肽指紋圖譜分析及蛋白質(zhì)鑒定在內(nèi)的多種蛋白質(zhì)分子量分析需求。
進(jìn)入質(zhì)譜之前的反相色譜分離過程中連接了紫外檢測(cè)器,在實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品分離的同時(shí),還會(huì)對(duì)樣品的純度進(jìn)行評(píng)估;色譜分離的過程也降低了在準(zhǔn)確分子量檢測(cè)過程中對(duì)樣品純度的要求。
Orbitrap高分辨質(zhì)譜利用軟件對(duì)質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí),可以根據(jù)TIC(總離子流圖)分別對(duì)樣品中的主要成分和次要成分的分子量進(jìn)行選擇和分析。然后對(duì)上述原始數(shù)據(jù)進(jìn)行去卷積處理,得到該蛋白樣品中主要成分的準(zhǔn)確分子質(zhì)量。